Secuenciación directa del gen supresor tumoral p53

En el 98% de los casos las mutaciones del gen p53 se encuentran entre los codones 100 al 300 (exones 5 al 9). Para el estudio de las alteraciones de este gen es muy útil la secuenciación de segmentos génicos amplificados.
Material Biológico: Biopsia del tracto gastrointestinal
Extracción del ADN: "DNA Isolation KK (Gentra USA)"
Genes: exon5 (240pb), exon6 (187pb), exon7 (134pb), exon8-9 (332pb)
Amplificación del ADN:
D inicial: 94ºC-4min
D: 94ºC-1min    (35 CICLOS)

H: 60ºC-1min (exones 6 y 8)     62ºC-1min (exones 5 y 7)    (35 CICLOS)

E: 72ºC-1min    (35 CICLOS)

E final: 72ºC-7min

Visulización: Electroforesis

Secuenciación de productos PCR: kit "T7 Sequenase PCR product sequencing (Amersham)" y 35S-dCTP

ARTICULO

REFERENCIAS:

http://www.scielo.cl/scielo.php?pid=S0034-98872000000900006&script=sci_arttext

PCR para la identificación de H. pylori

Helicobacter pylori es el causante de la neoplasia gástrica, y se la puede identificar mediante PCR en tejidos gástricos de pacientes con esta patología.

GENES: vacA de 120/150 pb y cagA de 181 pb

MUESTRA: Biopsia gástrica

EXTRACCION:
Lisis por calentamiento a 120 °C por 20 min
Separación con fenol/cloroformo
Purificación con isopropanol

AMPLIFICACIÓN:
Desnaturalización inicial a 94 °C por 4 min
Desnaturalización de 1 min a 94 °C (40 ciclos)
Hibridación de 2 min a 58 °C (40 ciclos)
Extensión de 1,5 min a 72 °C (40 ciclos)
Extensión final de 10 min a 72 °C

ARTICULO

REFERENCIAS:
http://www.bvs.sld.cu/revistas/rhab/vol_12_2_13/rhcm17213.htm