Secuenciación directa del gen supresor tumoral p53

En el 98% de los casos las mutaciones del gen p53 se encuentran entre los codones 100 al 300 (exones 5 al 9). Para el estudio de las alteraciones de este gen es muy útil la secuenciación de segmentos génicos amplificados.
Material Biológico: Biopsia del tracto gastrointestinal
Extracción del ADN: "DNA Isolation KK (Gentra USA)"
Genes: exon5 (240pb), exon6 (187pb), exon7 (134pb), exon8-9 (332pb)
Amplificación del ADN:
D inicial: 94ºC-4min
D: 94ºC-1min    (35 CICLOS)

H: 60ºC-1min (exones 6 y 8)     62ºC-1min (exones 5 y 7)    (35 CICLOS)

E: 72ºC-1min    (35 CICLOS)

E final: 72ºC-7min

Visulización: Electroforesis

Secuenciación de productos PCR: kit "T7 Sequenase PCR product sequencing (Amersham)" y 35S-dCTP

ARTICULO

REFERENCIAS:

http://www.scielo.cl/scielo.php?pid=S0034-98872000000900006&script=sci_arttext