Secuenciación directa del gen supresor tumoral p53

En el 98% de los casos las mutaciones del gen p53 se encuentran entre los codones 100 al 300 (exones 5 al 9). Para el estudio de las alteraciones de este gen es muy útil la secuenciación de segmentos génicos amplificados.
Material Biológico: Biopsia del tracto gastrointestinal
Extracción del ADN: "DNA Isolation KK (Gentra USA)"
Genes: exon5 (240pb), exon6 (187pb), exon7 (134pb), exon8-9 (332pb)
Amplificación del ADN:
D inicial: 94ºC-4min
D: 94ºC-1min    (35 CICLOS)

H: 60ºC-1min (exones 6 y 8)     62ºC-1min (exones 5 y 7)    (35 CICLOS)

E: 72ºC-1min    (35 CICLOS)

E final: 72ºC-7min

Visulización: Electroforesis

Secuenciación de productos PCR: kit "T7 Sequenase PCR product sequencing (Amersham)" y 35S-dCTP

ARTICULO

REFERENCIAS:

http://www.scielo.cl/scielo.php?pid=S0034-98872000000900006&script=sci_arttext

PCR para la identificación de H. pylori

Helicobacter pylori es el causante de la neoplasia gástrica, y se la puede identificar mediante PCR en tejidos gástricos de pacientes con esta patología.

GENES: vacA de 120/150 pb y cagA de 181 pb

MUESTRA: Biopsia gástrica

EXTRACCION:
Lisis por calentamiento a 120 °C por 20 min
Separación con fenol/cloroformo
Purificación con isopropanol

AMPLIFICACIÓN:
Desnaturalización inicial a 94 °C por 4 min
Desnaturalización de 1 min a 94 °C (40 ciclos)
Hibridación de 2 min a 58 °C (40 ciclos)
Extensión de 1,5 min a 72 °C (40 ciclos)
Extensión final de 10 min a 72 °C

ARTICULO

REFERENCIAS:
http://www.bvs.sld.cu/revistas/rhab/vol_12_2_13/rhcm17213.htm

Tipo de muestra para el diagnóstico del cáncer gástrico

La endoscopia superior se la realiza para la toma de muestra de una biopsia del tejido gástrico para identificar la presencia de células cancerígenas. La muestra se la somete a procesos inmunohistoquímicos que nos permite observar la presencia de una proteína denominada HER2, que en células cancerígenas se encuentra elevada.

• Si los resultados son 0 o 1+, el cáncer es HER2 negativo.
• Si los resultados de la prueba indican 3+, el cáncer es HER2 positivo. Las pacientes con tumores HER2 positivos pueden ser tratadas con medicamentos, como con trastuzumab.
• Cuando el resultado es 2+, la condición de HER2 del tumor no está clara. Esto a menudo conduce a evaluar el tumor con FISH.

Pasos para la extracción del ADN de H. pylori a partir de biopsia gástrica:

1. Cada muestra fue colocada en un tubo Eppendorf estéril y mantenida a -20ºC para su posterior análisis. 
2. El trozo de tejido fue suspendido en 100 µl de solución salina y fue macerado con una varilla plástica. 
3. El ADN genómico fue extraído utilizando un equipo comercial para células y tejidos (NucleoSpin® Tissue Macherey Nagel) siguiendo las instrucciones de los fabricantes y se conservó a -20ºC hasta su procesamiento. 

REFERENCIAS:

http://www.cancer.org/espanol/cancer/cancerdeestomago/guiadetallada/cancer-de-estomago-early-diagnosis

http://www.unne.edu.ar/unnevieja/investigacion/com2009/CM-079.pdf

http://www.javeriana.edu.co/biblos/tesis/ciencias/tesis313.pdf

Sobreexpresión de receptores de membrana que causan el cáncer gástrico

HER2 ubicado en el cromosoma 17q21, es un gen que codifica para un receptor de tirosinaquinasa transmembrana que pertenece a la familia de los receptores de factores de crecimiento epidermoide (EGFR). En el cáncer gástrico, HER2 actúa como un oncogen, ya que hay una sobreexpresión de dicha proteina en la membrana celular debido a la amplificación del gen. HER2 posee un dominio extracelular que se une a un ligando que puede generar una cascada de señales de transducción que pueden influenciar en varios aspectos de la biología celular del tumor incluyendo proliferación, apoptosis, adhesión, migración y diferenciación.

REFERENCIAS:
http://www.scielo.org.pe/scielo.php?pid=S1022-51292010000400006&script=sci_arttext
http://www.scielo.cl/scielo.php?pid=S0034-98872000001100013&script=sci_arttext
http://www.nature.com/clpt/journal/v81/n6/images/6100160f1.jpg

GEN SUPRESOR DE TUMORES P53 EN EL CÁNCER GÁSTRICO

El gen supresor de tumores p53 está localizado en el brazo corto del cromosoma 17 y codifica para una proteína del mismo nombre cuya función es la regulación transcripcional. Esta proteína está encargada de inducir la muerte celular de aquellas células que poseen un daño de ADN por radiación gama, ultravioleta y cancerígenos. Durante el proceso de transcripción celular cuando este gen se encuentra mutado, usualmente transiciones a nivel del sitio CpG5 del genoma (sitio más suceptible a mutaciones que posee gran cantidad de citosinas y guaninas), el RNAm que codifica para esta proteína posee la información errónea, por lo que la protrína resultante no cumplirá la función de supresor tumoral, permitiendo a las células genéticamente dañadas que sigan con su vida y a la posterior formación de células tumorales.

REFERENCIAS:
http://www.scielo.cl/scielo.php?pid=S0034-98872000001100013&script=sci_arttext
http://www.incan.org.mx/revistaincan/elementos/documentosPortada/1272302472.pdf
http://eusalud.uninet.edu/misapuntes/index.php/Bases_Moleculares_de_las_Neoplasias

Helicobacter pylori en la génesis de la neoplasia gástrica

Dentro del tema de la epigenetica relacionada con la neoplasia gastrica esta la que es causada por la presencia de helicobacter pylori. Esta bacteria al infectar la mucosa del estomago provoca gastritis crónica atrófica multifocal, lo cual da que la concentraci'on de acido clorhidrico aumente y por consiguiente se crea un ambiente mas propicio para el crecimiento de estas bacterias. Durante su estancia en la mucosa gastrica, estas bacteria producen nitrosaminas y nitrosamidas, sustancias mutagenicas que modifican la estructura del ADN de las celulas epiteliales del estomago. Este cambio de estructura del ADN provoca un cambio en la expresion de los genes que controlan la apoptosis, proliferacion y crecimiento celular. Al verse afectado este proceso, se da una descontrolada division y proliferacion celular que provoca errores en la replicacion y la aparicion de celulas cancerigenas que determinan la neoplasia maligna de estomago.

REFERENCIAS:
http://bvs.sld.cu/revistas/onc/vol14_3_98/onc06398.htm
http://med.unne.edu.ar/revista/revista162/3_162.htm
http://www.lemona.biz/SALUD%20Y%20CEMENTO-2/estudio%20cancer.pdf

REPLICACIÓN EN LA NEOPLASIA GÁSTRICA

La neoplasia de estómago se da en la mayoría de casos a nivel de las células basales de las foveolas gástricas. Investigaciones recientes han demostrado que la causa de esta enfermedad esta asociada a factores proteicos de crecimiento celular (FC), cuya información genética está contenida en el ADN.


Normalmente FC está presente en concentraciones bajas, pero cuando por algún motivo ocurre un aumento en la expresión de estos genes, ya pueda ser por mutación o falla durante la replicación del ADN. La formación del complejo FC-receptorFC en la célula gástrica, induce a la proliferación acelerada y formación de tumores. Muchas veces esta clase de errores en la información genética son repuestos por los mecanismos de replicación, pero cuando durante este proceso de reposición del error, la célula es inducida a la proliferación por el complejo FC-rFC, una proteína llamada p53 induce la muerte de ésta célula para que el error no continúe en las células hijas. La neoplasia ocurre prácticamente cuando fallan los mecanismos de regulación de p53 y no se produce apoptosis celular, por consiguiente hay crecimiento celular descontrolado.

REF:
http://www.scielo.sa.cr/scielo.php?pid=s0001-60022002000200002&script=sci_arttext
IMAGEN:
http://www.discoverymedicine.com/Joana-D-Amaral/files/2010/02/rodrigues_no45_figure_1.jpg
http://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/7/7b/C%C3%A1ncer1.png